首页 > 血型 > A型血 > 含有a血型的抗原、血型抗原a的Elisa检测

含有a血型的抗原、血型抗原a的Elisa检测

时间：2025-04-25 18:10:01 作者：小编三三来源：水镜先生网

一、检测原理与抗原制备

1. 抗原来源

A血型抗原主要存在于红细胞膜表面，通过提取红细胞膜蛋白获得。具体方法包括：

洗涤A型红细胞（EDTA抗凝血），去除血浆及白细胞。

低渗液（如10 mmol/L Tris-HCl）溶血后离心，获得红细胞“血影”（膜结构）。

使用尿素溶解膜蛋白，并通过复性缓冲液（含Tris-HCl、EDTA、GSH等）透析恢复蛋白活性。

抗原需通过改良红细胞凝集抑制实验（HI实验）验证其特异性，确保仅与抗A抗体反应。

2. 检测类型

间接ELISA：将A抗原包被于酶标板，检测样本中的抗A抗体（如IgM型）。

夹心ELISA：若需直接检测样本中的A抗原，需使用抗A单克隆抗体作为捕获抗体和检测抗体。

二、实验步骤（以间接ELISA检测抗A抗体为例）

1. 包被抗原

用包被缓冲液（如pH 9.6碳酸盐缓冲液）稀释A抗原至1-10 μg/mL，加入酶标板（100 μL/孔），4℃过夜。

洗涤3次（PBST溶液），去除未结合的抗原。

2. 封闭非特异性位点

加入封闭液（如5%牛血清白蛋白或新生牛血清，300 μL/孔），37℃封闭3小时，防止非特异性结合。

3. 加样与孵育

加入稀释后的待测血浆（如B型血浆含抗A抗体）或标准品（人IgM梯度稀释液），37℃孵育1小时。

洗涤6次，去除未结合的抗体。

4. 酶标二抗反应

加入HRP标记的羊抗人IgM二抗（1:8 000稀释），37℃孵育1小时。

洗涤8次，确保去除未结合的酶标抗体。

5. 显色与终止

加入TMB底物溶液（100 μL/孔），避光显色5-30分钟，颜色深浅与抗体浓度正相关。

用2 mol/L硫酸终止反应（50 μL/孔）。

6. 结果分析

酶标仪读取450 nm吸光度值（OD450），通过标准曲线（Logistic四参数模型）定量抗体浓度。

临床验证时需与试管法效价评分进行相关性分析（SPSS统计软件）。

三、关键优化与验证

1. 条件优化

采用棋盘滴定法确定抗原和抗体的最佳工作浓度，减少背景干扰。

显色时间需根据试剂灵敏度调整，避免过短（信号弱）或过长（背景高）。

2. 特异性与重复性

通过ROC曲线确定检测临界值，验证试剂盒灵敏度（真阳性率）和特异性（真阴性率）。

批内和批间变异系数需<10%，确保结果稳定。

3. 临床样本处理

血浆或血清需新鲜或-20℃保存，避免反复冻融导致蛋白降解。

溶血或脂血样本需预处理（离心、过滤）以减少干扰。

四、应用与局限性

1. 应用场景

输血安全：评估ABO不相容血液制品输注前的抗体浓度风险。

器官移植：监测受者体内抗A抗体水平，减少排斥反应。

疾病诊断：辅助诊断新生儿溶血病或自身免疫性疾病。

2. 局限性

红细胞膜抗原制备复杂，需避免蛋白变性影响检测准确性。

高浓度类风湿因子或补体可能引起假阳性，需通过封闭或稀释消除。

五、相关试剂与设备

试剂盒：包括A抗原包被板、酶标二抗、TMB显色液、终止液等。

仪器：酶标仪、离心机、微孔板振荡器等。

标准品：人IgM或纯化抗A抗体用于定量标定。

以上方法结合了红细胞抗原提取技术、ELISA标准化流程及临床验证要求，适用于A血型抗原或抗体的精准检测。具体操作需参考试剂盒说明书并结合实验室条件调整参数。

含有a血型的抗原、血型抗原a的Elisa检测

星座属相血型配对夫妻血型配对检测名字好不好

精彩推荐

血型a和a生出什么血型的孩子吗-一个a一个b能生出什么血型的孩子: 一、父母均为A型血（A+A） 1. 可能的基因型组合 A型血的基因型可能是 AA（纯合显性）或 AO（杂合显性）。父母的血型组合可能是以下三种情况： AA × AA：所有孩子的基因型均为 AA，表现为 A; 2025-04-25